کلون کردن اپی توپ های خطی تحریک کننده ی لنفوسیت t آنتی ژن eg۹۵ اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pgex۴t۱ و بررسی بیان آن با روش sds-page

زمینه و هدف: انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفق­ترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتی­ژن 25 کیلو دالتونی آن یعنی eg95 در وکتور pgex می­باشد که ایمنی سلولی و همورال قابل توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی th1 در غلبه بر این بیماری و نقش اپی­توپ­های خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی تحریک کننده لنفوسیت t این آنتی­ژن کلون و بیان شد. مواد و روش­ها: با استفاده از نرم افزار iedb توالی کد کننده ی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن eg95 پیش­بینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با pcr انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور pgex4t1 با آنزیم xhoi، در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونی­های مثبت با روش colony pcr با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول bl21 با 10%sds-page موردبررسی قرار گرفت. نتایج: تکثیر توالی کد کننده اپی­توپ­های eg95 با pcr انجام و قطعه موردنظر در وکتور pgex4t1 کلون گردید. تأیید پلاسمید نوترکیب با colony pcr و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتی­ژن نیز به وضوح با sds-page مشخص شد. نتیجه­ گیری: قطعه eg95 به طور موفقیت­آمیزی در وکتور pgex4t1 کلون و در سلول bl21 بیان شد.